，进一步证实了相应的高和低表达水平补充图4f。

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?然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测 hlf 对 nsclc 远处转移能力的影响，将载体/ncih1975、hlf 过表达 ncih1975、载体/ncih460 和 hlfsh1/ncih460 细胞接种到小鼠左心室。

?接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行 h&;;e 染色处理。如图所示。图3fi和补充图4g，我们在与载体组相比，过 hlf 表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。

?相比之下，沉默hlf可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期图3fi和补充图4h。

?因此，这些结果表明，低表达 hlf 的 nsclc 细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。

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?我们利用k8、集落形成和an连接素凋亡进一步研究了 hlf 在 nsclc 中的生物学功能，发现在正常培养条件下，hlf 对 nsclc 细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响补充图5a–c。

?我们的结果显示，上调 hlf 会增加培养液的ph水平，而沉默 hlf 会降低培养基的ph水平，但正常情况下 hlf 并不影响 nsclc 细胞的表型和数量补充图5d。

?低表达 hlf 可能通过营养代谢途径促进 nsclc 细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。

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?然而，上调 hlf 抑制 nsclc 的生长，而沉默 hlf 可促进 nsclc 细胞的锚定和悬浮生长能力图4a和b，表明沉默 hlf 增强了 nsclc 细胞在悬浮条件下的生存能力，即 anoikis 耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。

?事实上，昼夜节律基因的失调导致了 nsclc 的代谢失调，hlf 广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。

&n/l培养液组成的低营养条件下，hlf 过表达抑制了

nsclc 细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然（图4ce）。

? hlf 参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是 hlf 抑制 nsclc 细胞生长的前提条件。

?在低营养条件下观察 nsclc 细胞 hlf 对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6a，hlf 表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，hlf 的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平图4f–i。

?矛盾的是，上调 hlf 增加了细胞内 atp 的总产生和 ldh 的活性补充图6b和c）。这些发现表明，在低营养条件下，过表达 hlf 的癌细胞更容易发生有氧代谢而不是厌氧代谢，这进一步支持了上调 hlf 降低乳酸脱氢酶ldh的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因。

?相反，沉默 hlf 则表现出相反的代谢特性，促进了 nsclc 细胞的厌氧代谢图4fi和补充图6c和d。上诉结果表明，低表达hlf促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。

?事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达 hlf 可促进 nsclc 细胞从三羧酸循环向厌氧代谢